技術(shù)文章

Technical articles

當(dāng)前位置:首頁技術(shù)文章全波長酶標(biāo)儀為何如此“與眾不同”呢?

全波長酶標(biāo)儀為何如此“與眾不同”呢?

更新時(shí)間:2017-08-14點(diǎn)擊次數(shù):2044
全波長酶標(biāo)儀以光柵為分光元件、以微孔板為樣品載具的生化識讀設(shè)備,主要用于科研領(lǐng)域。全波長酶標(biāo)儀與傳統(tǒng)的濾光片型酶標(biāo)儀相比,具有如下優(yōu)勢:
一、全波長酶標(biāo)儀波長選擇不受限制
總體來說,濾片技術(shù)由于發(fā)展已久,配合二向色鏡(其實(shí)也就是另一模式的濾光反光濾鏡)等光路系統(tǒng),可以滿足大部分實(shí)驗(yàn)的需要,是日常檢驗(yàn)的主流。
但是濾光片型儀器由于受限于濾片的波長和數(shù)量限制,不可能滿足日益增加的實(shí)驗(yàn)類型的檢測需要,而且有時(shí)需要對物質(zhì)的吸收、激發(fā)和發(fā)射光譜進(jìn)行研究,所以后來就誕生了光柵型的儀器。
二、全波長酶標(biāo)儀雜光率低,波長準(zhǔn)確性高
光柵型濾光系統(tǒng)儼然已經(jīng)成為了目前通用性多功能酶標(biāo)儀的主流,多家廠家共同努力,已經(jīng)把光柵技術(shù)推到了歷史新高。在光柵的眾多技術(shù)參數(shù)之中,zui關(guān)鍵的無疑就是光柵的雜光率和波長選擇的準(zhǔn)確性了。
雜光率指得就是光源通過光柵后,得到的光線中,“不需要”的波長的光占所標(biāo)稱波長的光的比例,表征了濾光的純度。由于光線干涉、衍射等的復(fù)雜性,無論使用濾光片還是光柵,雜光都是不可避免的。各種濾光技術(shù)的本質(zhì)就是要想辦法把雜光盡可能地去掉。一般來說,濾光片型的雜光率在10-4——10-5之間,光柵型的可以做到10-6——10-7。由于此類雜光是非特異的,而且會直接進(jìn)入zui后的檢測器,所以有多少的雜光就會引入多少的隨機(jī)誤差。在熒光等檢測過程中,由于檢測器存在放大效應(yīng),雜光率的干擾也會被指數(shù)級放大。因此,雜光率就是一個(gè)濾光系統(tǒng)的首要性能指標(biāo)。
光柵的另一個(gè)重要指標(biāo)就是波長選擇的準(zhǔn)確性。因?yàn)楹芏鄼z測是依賴于物質(zhì)在某個(gè)波長的特征圖譜。就像DNA/RNA的OD260濃度測定,實(shí)際檢測波長偏離260nm幾個(gè)nm以上的話,OD值與zui終濃度之間的數(shù)學(xué)關(guān)系就會發(fā)生改變。因此,一組性能優(yōu)良的光柵系統(tǒng),它的波長選擇準(zhǔn)確性應(yīng)該是在±0.5——1nm之間。波長偏離過大有時(shí)就會影響到zui終結(jié)果的準(zhǔn)確性,
這兩個(gè)參數(shù)可謂是光柵甚至濾光片濾光系統(tǒng)zui關(guān)鍵的技術(shù)參數(shù),直接影響到的是得到數(shù)據(jù)是否是真正所要測量的結(jié)果,是實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠性的zui基本要求。
三、全波長酶標(biāo)儀檢測靈敏度高
在保證檢測可靠的基礎(chǔ)上,不同儀器的下一個(gè)差異就體現(xiàn)在檢測的靈敏度上面,這時(shí)人們關(guān)心的就是儀器能夠檢測到多弱的信號。
靈敏度涉及了整個(gè)光路系統(tǒng)的設(shè)計(jì)和選料,很難說某一個(gè)部件會起決定性作用。但是有一點(diǎn),在各種單功能檢測項(xiàng)目中,光吸收檢測用非放大型的光電二極管、熒光檢測用光電倍增管、發(fā)光檢測用專門設(shè)計(jì)的單光子計(jì)數(shù)光電倍增管,這三種不同的檢測器是各自檢測領(lǐng)域的優(yōu)先選擇。
各單項(xiàng)檢測的*結(jié)果都是用相應(yīng)檢測器完成的。當(dāng)然也有的儀器出于成本等考慮,用一個(gè)檢測器兼容多種檢測模式,這在一定程度上也能完成實(shí)驗(yàn)需求,但是在性能上也會有所犧牲折中,無法實(shí)現(xiàn)各項(xiàng)檢測都達(dá)到*化。